Изучение активности ФМСФ-ингибируемой карбоксипептидазы в тканях самцов крыс

3.2.2. Изучение активности ФМСФ-ингибируемой карбоксипептидазы в тканях самцов крыс

а) Распределение активности ФМСФ-ингибируемой карбоксипептидазы в тканях интактных самцов крыс

Полученные данные о распределении активности ФМСФ-КП в тканях самцов крыс представлены в таблице 15.

Максимальная активность фермента у самцов обнаружена в надпочечниках, в гипофизе активность была в 3,2 раза ниже, в гипоталамусе и стриатуме примерно в 6 раз ниже, а в семенниках в 10 раз ниже, чем в гипофизе. Приведенные нами данные о распределении активности ФМСФ-КП в тканях самцов хорошо согласуются с полученными ранее другими исследователями [35, 91].

Стоит отметить, что активность ФМСФ-КП в гипофизе и половых железах у самцов достоверно меньше, чем у самок на любой из стадий эстрального цикла.

Таблица 15. Активность ФМСФ-КП в тканях самцов в норме (нмоль продукта, образовавшегося за 1 мин инкубации на 1 мг белка, M±m, n=6¸8).

В надпочечниках у самцов активность фермента достоверно выше на 42% (p<0,05), чем у самок в стадии диэструса. В гипоталамусе и стриатуме половых отличий в активности ФМСФ-КП не обнаружено. Таким образом, вероятно, данный фермент вовлекается в детерминацию различий в уровне регуляторных пептидов у самок и самцов [90].

б) Активность ФМСФ-ингибируемой карбоксипептидазы при внутрибрюшинном введении физиологического раствора в тканях самцов

Через 0,5 часа после инъекции физраствора в гипофизе не наблюдалось изменений в активности фермента, однако через 4 и 18 часов активность ФМСФ-КП возрастала на 56% и 40% соответственно относительно интактной группы животных. В гипоталамусе увеличение активности ФМСФ-КП обнаруживалось только через 0,5 часа после внутрибрюшинного введения физиологического раствора на 23% по сравнению с нормой. В стриатуме, надпочечниках и яичниках введение физраствора не влияло на активность ФМСФ-КП (рис. 4).

Через 0,5 часа после введения физраствора активность ФМСФ-КП у самцов подвергалась изменениям только в гипоталамусе, где активность фермента увеличивалась относительно интактной группы животных. У самок же ни на одной из стадий эстрального цикла активность фермента не изменялась в этом отделе. На стадии диэструса введение физиологического раствора приводило к возрастанию активности ФМСФ-КП в стриатуме, надпочечниках и яичниках, на стадии проэструса – к уменьшению активности в стриатуме и к ее увеличению в яичниках по отношению к норме. На стадии эструса активность ФМСФ-КП через 0,5 часа после введения физраствора изменялась только в гипофизе, где она снижалась по сравнению с интактной группой животных.

Через 4 часа после инъекции физиологического раствора наблюдалось увеличение активности ФМСФ-КП у самцов только в гипофизе относительно нормы, в других отделах активность фермента не изменялась. У самок в гипофизе на стадии диэструса активность ФМСФ-КП, напротив, уменьшалась, а в проэструсе и эструсе не изменялась по сравнению с интактной группой крыс. В стриатуме на стадии проэструса активность фермента снижалась по отношению к норме. В яичниках на всех стадиях эстрального цикла активность ФМСФ-КП достоверно увеличивалась относительно нормы.

Через 18 часов после введения изотонического раствора NaCl у самцов, как и через 4 часа после воздействия, активность ФМСФ-КП в гипофизе была выше, чем в норме. У самок в эструсе активность фермента после введения физраствора в этом отделе, напротив, была выше, чем у интактной группы животных. Снижение активности ФМСФ-КП у самок на стадии эструса отмечалось также в гипоталамусе, стриатуме и яичниках по сравнению с нормой. В то время как в диэструсе в надпочечниках и яичниках активность ФМСФ-КП возрастала по отношению к интактной группе самок.

Таким образом, введение физраствора приводило к более существенному изменению активности фермента у самок, чем у самцов, причем, у самок эти изменения затрагивали не только гипофиз и гипоталамус, но и другие исследуемые отделы. Кроме того, характер изменения активности ФМСФ-КП был разным у самцов и самок.

в) Исследование активности ФМСФ-КП при внутрибрюшинном введении этанола в тканях самцов крыс

В гипоталамусе после введения этанола в дозе 1 г/кг через 4 и 18 часов активность фермента была выше, чем у контрольной группы животных на 28% и 10% соответственно, при введении этанола в дозе 4 г/кг через 4 часа активность ФМСФ-КП также была выше, чем в контроле на 41%.

В стриатуме инъекция этанола не вызывала изменений в активности фермента. В надпочечниках активность ФМСФ-КП увеличивалась через 4 часа после введения этанола в дозе 1 г/кг и через 4 и 18 часов после введения этанола в дозе 4 г/кг на 20%, 45% и 18% соответственно по сравнению с контрольной группой самцов. В семенниках активность ФМСФ-КП достоверно возрастала только через 18 часов после инъекции этанола (доза 4 г на кг) в 2,7 раза по отношению к контролю. Такое отсроченное во времени изменение активности ФМСФ-КП, по сравнению с КПН, возможно, указывает на участие этих двух ферментов в биосинтезе различных нейропептидов.

Интересно отметить, что в гипофизе и стриатуме активность ФМСФ-КП через 4 часа после введения этанола в дозе 4 г/кг была достоверно выше, чем если этиловый спирт вводился в дозе 1 г/кг. В семенниках, напротив, через 0,5 часа после внутрибрюшинного введения этанола в дозе 1 г/кг активность фермента больше была, чем в том случае, если этанол вводился в дозе 4 г/кг. В надпочечниках также отмечено достоверное отличие во влиянии двух доз: через 18 часов после инъекции этанол в меньшей дозе не вызывал изменений в активности ФМСФ-КП, однако в большей дозе приводил к увеличению активности фермента относительно контроля.

Таким образом, наиболее существенные изменения в активности фермента наблюдались при введении этанола (доза 4 г на кг) в семенниках. Через 0,5 часа после инъекции этанола в любой из двух доз активность фермента оставалась на прежнем уровне во всех исследованных отделах. Через другие промежутки времени в тех отделах, где этанол вызывал изменения в активности ФМСФ-КП, характер этих изменений, в подавляющем большинстве случаев заключался в увеличении активности фермента.

Активность ФМСФ-КП зависела от времени после воздействия в гипофизе: она увеличивалась к 0,5 часа и продолжала нарастать вплоть до 4 часов после введения физраствора, затем к 18 часам активность фермента снижалась до уровня 0,5 часа, после инъекции этанола в дозе 1 г/кг активность ФМСФ-КП возрастала к 0,5 часа, затем несколько снижалась, но оставалась на уровне более высоком, чем у интактных самцов, в интервале от 4 до 18 часов, после введения этанола в дозе 4 г/кг активность ФМСФ-КП имела тенденцию к росту в первые четыре часа, в промежутке 4-18 часов активность фермента не изменялась (табл. 16).

В гипоталамусе активность ФМСФ-КП зависела от времени после введения физраствора и этилового спирта в дозе 4 г/кг, однако при введении этанола в дозе 1 г/кг динамики в изменении активности фермента во времени не было обнаружено. После введения физраствора активность ФМСФ-КП возрастала к 0,5 часа, снижалась до исходного уровня к 4 часам и вновь немного увеличивалась к 18 часам. При инъекции этанола в дозе 4 г/кг активность фермента имела тенденцию к увеличению в первые четыре часа, а к 18 часам она несколько снижалась.

В стриатуме зависимость активности фермента от времени наблюдалась только при введении этанола в дозе 4 г/кг. Причем характер этих изменений был идентичен тем, которые происходили в гипоталамусе при введении той же дозы этанола.

Таблица 16. Дисперсионный анализ влияние времени на активность ФМСФ-КП (значения отношения Фишера F_Ф и баллы экспериментальных (временных) подгрупп).

В семенниках достоверное влияние времени на активность ФМСФ-КП также обнаружено только после введении этанола в дозе 4 г/кг. При этом через 0,5 часа активность фермента снижалась ниже уровня, характерного для интактных крыс, затем активность увеличивалась и к 18 часам была выше, чем в норме.

Таким образом, при введении этилового спирта активность ФМСФ-КП зависела от времени в гипофизе, гипоталамусе, стриатуме и семенниках (в последних трех случаях только при инъекции этанола в большей дозе). У самцов, в отличие от самок, в надпочечниках активность фермента при введении этанола не зависела от времени.

Через 0,5 часа после воздействия этанол в дозе 1 г/кг не вызывал изменений в активности ФМСФ-КП у самцов, но приводил к увеличению активности фермента в гипофизе и половых железах у самок на стадии диэструса, в эструсе активность увеличивалась не только в вышеназванных отделах, но и в надпочечниках относительно контроля. На стадии проэструса наблюдалось увеличение активности ФМСФ-КП в стриатуме и уменьшение активности фермента в надпочечниках.

Через 4 часа после введения этанола в дозе 1 г/кг на стадии диэструса у самок во всех изученных отделах активность ФМСФ-КП возрастала по сравнению с контрольной группой животных, на стадии эструса активность фермента увеличивалась только в гипофизе, а в проэструсе – в гипоталамусе и стриатуме. В то время как у самцов изменения наблюдались только в двух отделах: в гипоталамусе и надпочечниках, где активность фермента возрастала относительно контроля.

Через 18 часов после введения этанола в дозе 1 г/кг у самок в диэструсе не наблюдалось изменений в активности фермента, а в эструсе во всех исследованных отделах происходило увеличение активности фермента по сравнению с контрольной группой животных. У самцов в гипофизе в отличие от самок активность ФМСФ-КП уменьшалась, а в гипоталамусе активность фермента, так же как и у самок на стадии эструса, возрастала по отношению к контролю.

При введении этанола в дозе 4 г/кг через 0,5 часа после его введения у самцов не было выявлено изменений в активности ФМСФ-КП. У самок же на стадии диэструса в яичниках активность фермента увеличивалась, в проэструсе – уменьшалась в гипофизе, надпочечниках и яичниках, на стадии эструса в яичниках также наблюдалось снижение активности фермента, однако в надпочечниках и стриатуме активность ФМСФ-КП возрастала по отношению к контрольной группе животных.

Через 4 часа после инъекции этанола (доза 4 г на кг) у самцов активность ФМСФ-КП не подвергалась изменениям в гипофизе и половых железах. У самок на стадии диэструса в гипофизе активность фермента увеличивалась, уменьшалась в эструсе и только в проэструсе оставалась на прежнем уровне относительно контрольных значений. В яичниках активность ФМСФ-КП на стадии эструса, как и в семенниках, не подвергалась изменениям, но увеличивалась в диэструсе и эструсе относительно контроля. Однонаправленные изменения в активности ФМСФ-КП обнаружены через 4 часа после введения этилового спирта в дозе 4 г/кг в гипоталамусе у самцов и самок в диэструсе и проэструсе по отношению к контрольной группе крыс. В стриатуме у самцов и самок на стадии проэструса активность фермента также возрастала, однако у самок в стадии эструса она уменьшалась по сравнению с контролем. На стадии диэструса и проэструса инъекция этанола не вызывала у самок изменений в активности ФМСФ-КП, но приводила к уменьшению активности фермента в эструсе, а у самцов вызывала увеличение активности ФМСФ-КП относительно контрольной группы животных.

Через 18 часов после введения этанола в дозе 4 г/кг у самок на стадии диэструса активность фермента уменьшалась в гипофизе и гипоталамусе, а на стадии эструса, наоборот, наблюдалось увеличение активности фермента во всех изученных отделах по сравнению с контролем. У самцов только в надпочечниках и семенниках активность ФМСФ-КП возрастала и не изменялась в других исследованных отделах относительно контрольной группы животных.

Таким образом, этанол вызывал изменения в активности ФМСФ-КП у крыс обоего пола, однако более существенно активность фермента менялась у самок по сравнению с самцами. Характер изменений в активности фермента у самцов и самок мог быть как одно-, так и разнонаправленным и зависел от времени, через которое проводилось исследование, дозы этанола, стадии полового цикла и отдела, в котором определялась активность ФМСФ-КП.